第一节 液体内沉淀试验
第一节 液体内沉淀试验
一、絮状沉淀试验
絮状沉淀试验为历史较久，又较有用的方法。该法要点是：将抗原与抗体溶液混合在一起，在电解质存在下，抗原与抗体结合，形成絮状沉淀物。这种沉淀试验受到抗原和抗体比例的直接影响，因而产生了两种最适比例的基本测定方法。
（一）抗原稀释法
抗原稀释法（Dean-Webb法）是将可溶性抗原作一系列稀释，与恒定浓度的抗血清等量混合，置室温或37℃反应后，产生的沉淀物随抗原的变化而不同。表12-1系以牛血清白蛋白为例的实验结果。
表12-1Dean-Webb定量沉淀试验
管号
抗原
抗体
总沉淀量
反应过剩物
抗原沉淀量
抗体沉淀量
沉淀中Ab/Ag
1
0.003
0.68
0.093
Ab
0.003
0.090
30.0
2
0.005
0.68
0.145
Ab
0.005
0.140
28.0
3
0.011
0.68
0.249
Ab
0.011
0.238
21.7
4
0.021
0.68
0.422
Ab
0.021
0.401
19.1
5
0.032
0.68
0.571
Ab
0.032
0.539
16.8
6
0.043
0.68
0.734
－
0.043
0.691
16.1
7
0.064
0.68
0.720
Ab
－
－
－
8
0.085
0.68
0.601
Ag
－
－
－
9
0.171
0.68
0.464
Ag
－
－
－
10
0.341
0.68
0.368
Ag
－
－
－
单位：mmol/L
从表12-1可以看出，1～5管为抗体过剩管，7～10管为抗原过剩管，唯第6管沉淀物最多，两者之比为16:1，即最适比。
（二）抗体稀释法（Ramon）法
本法采用恒定的抗原量与不同程度稀释的抗体反应，计算结果同上法，得出的是抗体结合价和最适比。
现今，为了取得抗原与抗体的最佳比例，已将以上两法相结合，即抗原和抗体同时稀释，称为棋盘格法（亦称方阵法），找出最佳配比。举例见表12-2。
表12-2方阵最适比测定
抗体稀释度
抗原稀释度
1/10
1/20
1/40
1/80
1/160
1/320
1/640
1/12
对照
1/5
＋
＋＋
＋＋＋
＋＋＋
＋＋
＋
±
－
－
1/10
＋
＋＋
＋＋
＋＋
＋＋＋
＋＋
＋
－
－
1/20
＋
＋
＋＋
＋＋
＋＋＋
＋＋
＋
－
－
1/40
－
±
＋
＋
＋＋
＋＋＋
＋＋
＋
－
1/80
－
－
－
－
＋
＋
＋
＋
－
“＋”为沉淀物量：为最适比
从表12-2可以看出，方阵法可较正确地找出抗原与抗体的最适比。如抗体用1:40。抗原则按1:320稀释；如抗原是1:160，抗本则用1:20最为恰当。
二、环状沉淀试验
环状沉淀试验是Ascoli于1902年建立的，其方法是：先将抗血清加入内径1.5～2mm小玻管中，约装1/3高度，再用细长滴管沿管壁叠加抗原溶液。因抗血清蛋白浓度高，比重较抗原大，所以两液交界处可形成清晰的界面。此处抗原抗体反应生成的沉淀在一定时间内不下沉。一般在室温放置10min至数小时，在两液交界处呈现白色环状沉淀则为阳性反应。本技术的敏感度为3～20μg/ml抗原量。环状试验中抗原、抗体溶液须澄清。该试验主要用于鉴定微量抗原，如法医学中鉴定血迹，流行病学用于检查媒介昆虫体内的微量抗原等，亦可用于鉴定细菌多糖抗原。因该技术敏感度低，且不能作两种以上抗原的分析鉴别，现已少用。
一、絮状沉淀试验
絮状沉淀试验为历史较久，又较有用的方法。该法要点是：将抗原与抗体溶液混合在一起，在电解质存在下，抗原与抗体结合，形成絮状沉淀物。这种沉淀试验受到抗原和抗体比例的直接影响，因而产生了两种最适比例的基本测定方法。
（一）抗原稀释法
抗原稀释法（Dean-Webb法）是将可溶性抗原作一系列稀释，与恒定浓度的抗血清等量混合，置室温或37℃反应后，产生的沉淀物随抗原的变化而不同。表12-1系以牛血清白蛋白为例的实验结果。
表12-1Dean-Webb定量沉淀试验
管号
抗原
抗体
总沉淀量
反应过剩物
抗原沉淀量
抗体沉淀量
沉淀中Ab/Ag
1
0.003
0.68
0.093
Ab
0.003
0.090
30.0
2
0.005
0.68
0.145
Ab
0.005
0.140
28.0
3
0.011
0.68
0.249
Ab
0.011
0.238
21.7
4
0.021
0.68
0.422
Ab
0.021
0.401
19.1
5
0.032
0.68
0.571
Ab
0.032
0.539
16.8
6
0.043
0.68
0.734
－
0.043
0.691
16.1
7
0.064
0.68
0.720
Ab
－
－
－
8
0.085
0.68
0.601
Ag
－
－
－
9
0.171
0.68
0.464
Ag
－
－
－
10
0.341
0.68
0.368
Ag
－
－
－
单位：mmol/L
从表12-1可以看出，1～5管为抗体过剩管，7～10管为抗原过剩管，唯第6管沉淀物最多，两者之比为16:1，即最适比。
（二）抗体稀释法（Ramon）法
本法采用恒定的抗原量与不同程度稀释的抗体反应，计算结果同上法，得出的是抗体结合价和最适比。
现今，为了取得抗原与抗体的最佳比例，已将以上两法相结合，即抗原和抗体同时稀释，称为棋盘格法（亦称方阵法），找出最佳配比。举例见表12-2。
表12-2方阵最适比测定
抗体稀释度
抗原稀释度
1/10
1/20
1/40
1/80
1/160
1/320
1/640
1/12
对照
1/5
＋
＋＋
＋＋＋
＋＋＋
＋＋
＋
±
－
－
1/10
＋
＋＋
＋＋
＋＋
＋＋＋
＋＋
＋
－
－
1/20
＋
＋
＋＋
＋＋
＋＋＋
＋＋
＋
－
－
1/40
－
±
＋
＋
＋＋
＋＋＋
＋＋
＋
－
1/80
－
－
－
－
＋
＋
＋
＋
－
“＋”为沉淀物量：为最适比
从表12-2可以看出，方阵法可较正确地找出抗原与抗体的最适比。如抗体用1:40。抗原则按1:320稀释；如抗原是1:160，抗本则用1:20最为恰当。
二、环状沉淀试验
环状沉淀试验是Ascoli于1902年建立的，其方法是：先将抗血清加入内径1.5～2mm小玻管中，约装1/3高度，再用细长滴管沿管壁叠加抗原溶液。因抗血清蛋白浓度高，比重较抗原大，所以两液交界处可形成清晰的界面。此处抗原抗体反应生成的沉淀在一定时间内不下沉。一般在室温放置10min至数小时，在两液交界处呈现白色环状沉淀则为阳性反应。本技术的敏感度为3～20μg/ml抗原量。环状试验中抗原、抗体溶液须澄清。该试验主要用于鉴定微量抗原，如法医学中鉴定血迹，流行病学用于检查媒介昆虫体内的微量抗原等，亦可用于鉴定细菌多糖抗原。因该技术敏感度低，且不能作两种以上抗原的分析鉴别，现已少用。